Resumo Os lactobacilos são probióticos com capacidade de desintoxicação da Aflatoxina (AF), encontrados em produtos fermentados, TGI de animais e meio ambiente. O objetivo deste estudo foi investigar a capacidade de isolados de frango de corte de Lactobacillus contra a Aflatoxina B1 (AFB1). Para tanto, 5 isolados de Lactobacillus de intestino de frango foram incubados com 100 ppb AFB1 em meio aquoso, e o efeito de diferentes parâmetros (frações celulares, tempo, temperatura, pH) na desintoxicação foi determinado por CLAE. O efeito melhorador de Lactobacillus salivarius (LS) contra AFB1 foi estudado em frangos de corte. Os resultados revelaram que LS (CR. 4) apresentou os melhores resultados (in vitro) em comparação com outros isolados [L. salivarius (CR. 3, CR. 4), L. agilis (CE. 2.1, CE. 3.1) e L. crispatus (CE. 28)]. Detritos celulares de CR. 4 mostraram desintoxicação significativamente maior (P < 0.05). A quantidade máxima de AFB1 foi desintoxicada a 30 °C (97%), pH 4.0 (99%) e 6 h (99,97%). O estudo in vivo mostrou que AFB1 diminuiu o ganho de peso (1,269 ± 0.04 g / ave), alimento consumido (2,161 ± 0.08 g / ave), proteína total sérica (2.42 ± 0.34 g / dl), albumina sérica (0.5 ± 0.22 gm / dl) e título de anticorpo (4.2 ± 0.83). As enzimas da função hepática foram encontradas (alanina transaminase (ALT): 32 ± 10.7 U / L) e aspartato transaminase (AST): 314.8 ± 27 U / L) elevadas em AFB1 alimentados com frangos. O tratamento com 1% LS não só diminuiu os efeitos tóxicos de AFB1 (grupo D), mas também melhorou a saúde geral dos frangos devido aos seus efeitos probióticos (p < 0.05) em comparação com o controle negativo (grupo A). A capacidade de desintoxicação do LS foi melhor do que o aglutinante comercial (CB) (0.2% Protmyc). Concluiu-se que a desintoxicação de AFB1 por Lactobacillus foi dependente da cepa, temperatura, pH e tempo. LS tem capacidade de desintoxicação contra AFB1 in vivo.

Abstract Lactobacilli are probiotics with Aflatoxin (AF) detoxification ability, found in fermented products, GIT of animals and environment. Purpose of this study was to investigate the ability of broiler isolates of Lactobacillus against Aflatoxin B1 (AFB1). For this purpose, 5 isolates of Lactobacillus from broiler gut were incubated with 100 ppb AFB1 in aqueous environment and effect of different parameters (cell fractions, time, temperature, pH) on detoxification was determined by HPLC. The ameliorative effect of Lactobacillus salivarius (LS) against AFB1 was studied in broiler. The results revealed that LS (CR. 4) showed the best results (in vitro) as compared to other isolates (L. salivarius (CR. 3, CR, 4), L. agilis (CE. 2.1, CE. 3.1) and L. crispatus (CE. 28). Cell debris of CR. 4 showed significantly higher detoxification (P<0.05). Maximum amount of AFB1 was detoxified at 30°C (97%), pH 4.0 (99%) and 6 h (99.97%). In vivo study showed that AFB1 decreased weight gain (1,269 ± 0.04 gm/ bird), feed consumed (2,161 ± 0.08 gm/ bird), serum total protein (2.42 ± 0.34 gm/ dl), serum albumin (0.5 ± 0.2 2 gm/dl) and antibody titer (4.2 ± 0.83). Liver function enzymes were found (alanine transaminase (ALT): 32 ± 10.7 U/L) and aspartate transaminase (AST): 314.8 ± 27 U/L) elevated in AFB1 fed broilers. Treatment with 1% LS not only decreased the toxic effects of AFB1 (group D) but also improved the overall health of broilers due to its probiotic effects (p<0.05) as compared to control negative (group A). The detoxification ability of LS was better than commercial binder (CB) (0.2% Protmyc). It was concluded that detoxification of AFB1 by Lactobacillus was strain, temperature, pH and time dependent. LS has detoxification ability against AFB1 in vivo.

Resumo Boophilus microplus é uma das principais espécies de carrapatos bovinos, causando grandes perdas econômicas para a indústria de laticínios em todo o mundo, incluindo o Paquistão. Triclorfon e deltametrina são usados no controle de carrapatos bovinos, e seus sprays também são usados em outros programas de controle de pragas que exercem pressão sobre os carrapatos para ganhar resistência. Este estudo tem como objetivo examinar o nível de resistência de Rhipicephalus microplus contra triclorfon e deltametrina. Os carrapatos ingurgitados foram coletados de duas regiões ecológicas de Khyber Pakhtunkhwa, KPK Paquistão, ou seja, Swat & Dir (Zona 1) e Charsadda & Nowshera (Zona 2). Quatro concentrações de acaricidas em duas e dez vezes ppm com três repetições para cada foram usadas em ambos os bioensaios. O ensaio de eclosão de ovos e testes de imersão em adultos foram usados para avaliar o status de resistência. A análise probit do ensaio de eclosão de ovos mostrou a maior porcentagem de eclosão na zona 1 em ambas as diluições (67% na diluição de duas vezes e 68,33% na diluição de dez vezes), enquanto a concentração letal (CL95) foi de 2,187 ppm e dose discriminante (DD) como 4,374 ppm para triclorfon. Na zona 2, a porcentagem de eclosão foi de 73 em duas vezes e 72% em dez vezes, enquanto LC95 foi registrado como 0,599 ppm e DD como 1,198 ppm. Os mesmos parâmetros foram estudados para a deltametrina, e na zona 1 a porcentagem de eclosão foi de 38% na diluição de duas vezes e 37% na diluição de dez vezes, enquanto CL95 foi registrado como 0,001 ppm e DD como 0,002 ppm. Na zona 2, a eclodibilidade foi registrada como 42% na diluição de duas vezes e 43% na diluição de dez vezes. Os valores para LC95 foram registrados como 0,001 ppm e DD como 0,002 ppm. Além disso, a análise do teste de imersão de adulto contra triclorfon revelou os valores de LC50 como 2,85 ppm e LC95 como 4,71 ppm na zona 1 e na zona 2 como 3,14 ppm e 5,28 ppm, respectivamente. Da mesma forma, LC50 e LC95 contra deltametrina foram registrados como 0,79 ppm e 1,71 ppm na zona 1 e 0,45 ppm e 4,325 ppm na zona 2, respectivamente. Com base nos achados deste estudo, o isolado Rhipicephalus microplus mostrou-se mais resistente ao acaricida amplamente utilizado, ou seja, triclorfon do que deltametrina. Para manter a eficácia dos acaricidas em nível nacional, o estudo recomenda o monitoramento contínuo da resistência.

Abstract Boophilus microplus is a major cattle tick specie causing great economic loss to the dairy industry throughout the globe including Pakistan. Trichlorfon and Deltamethrin are used to control bovine ticks, and their sprays are also used in other pest control programs that exert pressure on ticks to gain resistance. This study is aimed to examine the resistance level of Rhipiciphalus microplus against trichlorfon and deltamethrin. The engorged ticks were collected from two ecological regions of Khyber Pakhtunkhwa, KPK Pakistan i.e., Swat & Dir (zone-1), and Charsadda & Nowshera (zone-2). Four concentrations of acaricides in two-fold and ten-fold ppm with three replicates for each were used in both bioassays. Egg hatch assay and adult immersion tests were used to assess the resistance status. The probit analysis of egg hatch assay showed the highest hatching percentage in zone 1 on both dilutions (67-76% on two-fold and 68-88% on ten-fold dilution) while lethal concentration (LC95) was found to be 2.187 ppm and discriminating dose (DD) as 4.374 ppm for trichlorfon. In zone 2, hatching percentage was 73-84 on two-fold and 72-91% on ten-fold dilution while LC95 was recorded as 0.599 ppm and DD as 1.198 ppm. The same parameters were studied for deltamethrin and in zone 1 the hatching percentage was found as 38-56% on two-fold dilution and 37-80% on ten-fold dilution while LC95 was recorded as 0.001 ppm and DD as 0.002 ppm. In zone 2, the hatchability was recorded as 42-58% on two-fold and 43-85% on ten-fold dilution. The values for LC95 was recorded as 0.001 ppm and DD as 0.002 ppm. Further, analysis of adult immersion test against trichlorfon revealed the values of LC50 as 2.85 ppm and LC95 as 4.71 ppm in zone 1 and in zone 2 as 3.14 ppm and 5.28 ppm, respectively. Similarly, LC50 and LC95 against deltamethrin was recorded as 0.79 ppm & 1.71 ppm in zone 1 and 0.45 ppm & 4.325 ppm in zone 2, respectively. Based on the findings of this study, the isolated Rhipicephalus microplus was found to be more resistant to the widely used acaricides i.e., trichlorfon than deltamethrin. In order to maintain the efficacy of acaricides at country level, the study recommends continuous monitoring of resistance.

Resumo A tendência de produção de biocombustíveis a partir de triacilgliceróis de microalgas está aumentando, porque esse substrato é uma boa alternativa sustentável e vantajosa ao combustível de petróleo e gás. No presente estudo, isolados de microalgas indígenas foram selecionados de amostras de água (n = 30) e solo (n = 30) coletadas em três distritos de Punjab, Paquistão, para avaliar seu potencial de produção de biocombustíveis. As amostras foram inoculadas em placas de meio BG – 11 agar por incubação em temperatura ambiente de 25°C proporcionando 1000 lux por 16h de ciclo claro seguido de 8h de escuro por 15 dias. As amostras de água foram ricas em microalgas e 65.33% de microalgas (49 isolados) foram isolados do distrito de Faisalabad. Com base na morfologia microscópica, isolados de microalgas (n = 180) foram selecionados e submetidos à detecção de lipídios por ensaio de coloração com vermelho do Nilo. Isolados positivos para vermelho do Nilo (n = 23) foram processados para caracterização bioquímica (lipídica, proteica e de carboidratos). O isolado AIN63 apresentou maior teor de lipídios (17.4%) conforme detectado pelo ensaio de microvanilina. O isolado de alga AIN128 apresentou os melhores teores de proteína (42.91%) detectados pelo ensaio de Bradford, e o isolado AIN172 apresentou maiores teores de carboidratos (73.83%), conforme detectado pelo ensaio de anthrone. Os isolados de algas selecionados também foram analisados por espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier (FTIR) para confirmação da análise de carboidratos, proteínas e lipídios. Essas algas nativas têm potencial para a produção de biocombustíveis in vitro a partir de resíduos agrícolas.

Abstract Trend of biofuel production from microalgal triacylglycerols is enhancing, because this substrate is a good sustainable and advantageous alternative to oil and gas fuel. In the present study, indigenous micro algal isolates were screened from water (n=30) and soil (n=30) samples collected from three districts of Punjab, Pakistan to evaluate their biofuel production potential. The samples were inoculated on BG – 11 agar medium plates by incubating at room temperature of 25°C providing 1000 lux for 16h light cycle followed by 8h of dark cycle for 15 d. Water samples were found to be rich in microalgae and 65.33% microalgae (49 isolates) were isolated from Faisalabad district. On the basis of microscopic morphology microalgal isolates (n=180) were selected and subjected to lipid detection by Nile red staining assay. Nile red positive isolates (n=23) were processed for biochemical (lipid, protein and carbohydrates) characterization. AIN63 isolate showed higher lipids (17.4%) content as detected by micro vanillin assay. Algal isolate AIN128 showed best protein contents (42.91%) detected by Bradford assay and AIN172 isolate showed higher carbohydrate contents (73.83%) as detected by anthrone assay. The selected algal isolates were also analyzed by Fourier transform infrared (FTIR) spectroscopy for confirmation of carbohydrate, protein and lipid analysis. These indigenous algae have the potential for in-vitro biofuel production from agricultural waste.

Resumo O estudo foi planejado para avaliar a bioeficiência juntamente com a toxicidade da farinha de trigo integral fortificada com ferro e zinco em ratos albinos Sprague dawley. A farinha de trigo integral foi fortificada com diferentes dosagens de ferro sódico EDTA (NaFeEDTA), sulfato ferroso (FeSO4), óxido de zinco (ZnO) e sulfato de zinco (ZnSO4). Os ratos (n = 3) de cada grupo foram alimentados com farinha de trigo fortificada por 2 meses. Biomarcadores hepáticos incluindo fosfatase alcalina (ALP), alanina transaminase (ALT), aspartato aminotransferase (AST) e bilirrubina foram registrados a partir de amostras de soro. O aumento da concentração de ZnSO4 afetou os biomarcadores hepáticos como sendo os mais altos entre todos, enquanto os níveis de bilirrubina foram menores do que os ratos alimentados com dieta controle. Os fortificantes mencionados acima têm efeito insignificante nos biomarcadores renais, incluindo creatinina e ureia. Além disso, os parâmetros hematológicos também foram verificados e, segundo relatos, os ratos alimentados com EDTA de sódio e ferro apresentaram maior quantidade de hemoglobina, ferro e capacidade total de ligação de ferro. O maior nível de zinco foi observado em ratos alimentados com farinha de trigo integral fortificada com 60 mg/Kg de óxido de zinco. A observação microscópica do tecido hepático mostrou que ratos alimentados com farinha de trigo fortificada com ferro e zinco têm mais efeitos tóxicos, enquanto a apresentação histopatológica do tecido renal tem menos impacto tóxico. Concluiu-se que a fortificação obrigatória da farinha de trigo com ferro e zinco pode causar aumento dos biomarcadores séricos juntamente com toxicidade de órgãos vitais como o fígado, portanto a fração da farinha de trigo pode ser fortificada para atender os requisitos do grupo carente e vulnerável.

Abstract Study was planned to assess the bio-efficiency along with toxicity of iron and zinc fortified whole wheat flour in Sprague dawley albino rats. Whole wheat flour was fortified with different dosage of sodium iron EDTA (NaFeEDTA), ferrous sulphate (FeSO4), zinc oxide (ZnO) and zinc sulphate (ZnSO4). The rats (n=3) in each group were fed on fortified wheat flour for 2 months. Liver biomarkers including alkaline phosphatase (ALP), alanine transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) and bilirubin were recorded from serum samples. Increased concentration of ZnSO4 affected the liver biomarkers to be highest among all whereas, bilirubin levels were less than the rats fed on control diet. The above mentioned fortificants have negligible effect on renal biomarkers including creatinine and urea. Moreover, hematological parameters were also checked and reportedly, sodium iron EDTA fed rats presented highest amount of hemoglobin, iron and total iron binding capacity. Highest zinc level was observed in rats fed on whole wheat flour fortified with 60mg/Kg Zinc oxide. Microscopic observation of liver tissue depicted that rats fed on iron and zinc fortified wheat flour have more toxic effects whereas, histopathology presentation of kidney tissue has least toxic impact. It has been concluded that mandatory fortification of wheat flour with iron and zinc may cause increased serum biomarkers along with toxicity of vital organs like liver, hence fraction of wheat flour may be fortified to fulfill the requirements of deprived and vulnerable group.